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    EXPERIMENT

    卵白实行检测

    (一) WESTERN BLOTTING检测

    卵白质印迹法(免疫印迹实验)即Western Blot。其根本原理是经过特异性抗体对凝胶电泳处置过的细胞或生物构造样品举行着色, 再经过剖析着色的地位和着色深度取得特定卵白质在所剖析的细胞或构造中表达状况的信息。

    (二) ELISA检测

    酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体联合到聚苯乙烯等固相载体上, 使用抗原抗体联合专注性举行免疫反响的定性和定量检测办法。

    METHOD

    分类办法

    A、定性测定

    定性测定的后果判别是对受检标本中能否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的复杂答复,辨别用"阳性"、"阴性"表现。 "阳性"表现该标本在该测定体系中有反响。"阴性"则为无反响。用定性判别法也可失掉半定量后果,即用滴度来表现反响的强度, 实在质还是一个定性实验。在这种半定量测定中,将标本作一系列浓缩落伍行实验,呈阳性反响的最高浓缩度即为滴度。 依据滴度的上下,可以判别标本反响性的强弱,这比察看不浓缩标本呈色的深浅判别为强阳性、弱阳性更具定量意义。

    在直接法和夹心法ELISA中,阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反,阴性孔呈色深于阳性孔。

    B、定量测定

    ELISA操纵步调庞大,影响反响要素较多,分外是固相载体的包被难到达各个别之间的分歧,因而在定量测定中,每批测试均须用 一系列差别浓度的参考尺度品在相反的条件下制造尺度曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA,尺度曲线的范畴一样平常较宽, 曲线最高点的吸光度可靠近2.0,绘制时常用半对数值,以检测物的浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标,将各浓度的值逐点毗连, 所得曲线一样平常呈S形,其头、尾部曲线趋于平展,中间较呈直线的局部是最抱负的检测地区。测定小分子量物质常用竞争法, 其尺度曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相干。尺度曲线的外形因试剂盒所用形式的差异而略有差别。ELISA测定的尺度曲线留意图中 横坐标为对数干系,这更有利于测定体系的表达。

    (三) TUNEL法检测细胞凋亡

    细胞在产生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会堵截核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA举行电泳检测, 可以发明180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时,表露的3’-OH可以在末了脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标志的dUTP (fluorescein-dUTP) ,从而可以经过荧灯光显示微镜或流式细胞仪举行检测, 这便是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测细胞凋亡的原理。

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